国家斑马鱼资源中心 (China Zebrafish Resource Center)

平台发球者特点描述

    精子的细胞质敲除技术是人造指导者BP的附带说明、取代或掉换,靶精子的细胞质作文的代替物,装饰起来特派精子的细胞质如愿以偿定点装饰起来的企图。精子的细胞质敲除技术是反向遗传技术中最重要的技术中庸。精子的细胞质敲除斑马鱼广为流传地适合于遗传论、研制生物、细胞生物、医学、工作平台毒物学、水产血统运动场及倚靠以为运动场。

     果核是我国但是的国家层次斑马鱼资源平台,不得不胶料最大和投机性建房的高级的的单体斑马鱼血统体系和一支高优质的的专业古代的一种计量单位,高级的规范辩解、履行互相牵连技术发球者的高级的集中和高级的性能。 


地方水产血统体系


眼前,果核条目
TALEN和CRISPR/cas9技术介导的斑马鱼精子的细胞质敲除技术发球者。倘若你裁员了使习惯于精子的细胞质conditional knockout对过度重视详述的遗传装饰起来感兴趣,也欢送您与咱们明细的交流。。

1TALENtranscription activator-like (塔尔) effector nucleases中间物裁员发球者

     独自的细菌Xanthomonas sp.的TAL釉桨的核蛋白质接合域的氨基酸序列与其靶标部位的核蛋白质序列有不变的对应相干。运用TAL的序列模块,它可以被包装成与ARBI特异接合的舞台场面设计釉桨质。,如愿以偿内源性精子的细胞质目的推拿的目的。率先,咱们需求体系目的究竟哪个种特点TARG的重组核蛋白质酶。,在特派位点脱离靶精子的细胞质DNA,因此在即将到来的网站举行DNA手柄,譬如敲出、精子的细胞质敲除或点急变。

     果核体系了斑马鱼原始精子(PGC)高效、特伦特平台,与规矩塔伦裁员赛平台相形,可一切高效地检查赢得TALEN敲除子孙(尤其地指画于性能较低的TALEN靶位关于)。

塔伦技术法学示意图

2、CRISPR/Cas9中间物裁员发球者

     法学成簇淬熄短回文反复(CRISPR)是一类广为流传地散布于细菌精子的细胞质组说话中肯反复作文,短RNA的混合和工作 核糖核蛋白质)。crRNA经过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA接合,双股RNA的塑造,内切酶CAS釉桨(CRISPR)的导入 釉桨)在CRRNA序列靶点的可用于切割位点上的双股DNA。。理由CISPRO-CAS体系的法学,它可以用来改造真核生物的精子的细胞质组。,目的DNA上特别奔赴点的可用于切割,在翻新的PR合拍将引入目的DNA序列的急变。。该技术中运用的gRNA(guide-RNA)是将crRNA和tracrRNA衔接起来作为指引RNA,Cas9釉桨是一种类型 II CISPRO-CAS体系的围攻经过,HNH和RuvC类似的的两个核蛋白质酶作文域,靶DNA的补数法链和非补数法链。

     果核体系了斑马鱼原始精子(PGC)高效、特异表达斑马鱼偏爱的事物密码子Cas9(zCas9)的CRISPR/Cas9敲除平台,与规矩CAS9敲除平台相形,可一切高效地检查赢得Cas9敲除子孙(尤其地指画于性能较低的Cas9靶位关于);同时,果核还预备双自主(双)。 Cas9精子的细胞质敲除发球者在缺口说话中肯适合,CAS9敲除的违世终结可非常使变弱。。

 

gRNA-Cas9技术法学示意图

 

特异、高效的斑马鱼PGC手柄平台

平台发球者使满足与工艺流程

     眼前咱们预备AB装置的精子的细胞质敲除斑马鱼预备,AB是最广为流传地运用的规范遗传装置经过。,直系的担保获得了付托方接待纯洁装置的精子的细胞质敲除斑马鱼。同时,理由客户的需求,咱们还为TU和倚靠遗传装置预备精子的细胞质敲除。。

1. 欢送与咱们议论技术详述和特定需求。,单方订约技术发球者和约。

2. 平台由单方协同议论的技术履行。。它包罗预备塔伦序列褒奖模块(1周)或Syt。。

3. 胚胎的显微颜色会变化的和急变检测。平台向斑马鱼胚胎中颜色会变化的TALEN mRNA或GRN-CAS9 mRNA复合肌。决定胚胎群体无论颜色会变化的了靶精子的细胞质急变。,如有,将P0代急变斑马鱼培育至性成熟(3月)。

4. 检查出能交付企图精子的细胞质敲除的P0代斑马鱼,与野生型斑马鱼使相交(或同一事物精子的细胞质型P0代自交),F1代(5天)的发觉。

5. 将F1代急变斑马鱼培育至2月龄(可以剪尾鳍举行逐尾评议),F1精子的细胞质敲除靶精子的细胞质的评议及其敲除特点,交付客户(2个月)。

发球者接受报价

   果核接受报价在订约合同书后140个工作日内,至多成地开拓了每个靶精子的细胞质的精子的细胞质敲除线。 ≥2  尾PCR评议正面的F1代斑马鱼(每个解读密码位移框急变正面斑马鱼≥1 尾)和相符合的侧交F2代胚胎(≥100枚)。


类型急变测序峰图

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